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PH0636 | SYBR Green I (10000×) 电泳用 
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货号: PH0636 品牌: Phygene
规格: 50ul 单位:
容量: 50ul

货号:PH0636

规格:50μL

保存:-20℃,避光保存。


SYBR Green I 是高灵敏的 DNA 荧光染料,适用于各种电泳分析,操作简单,至少可检出 20pg DNA,高于 EB 染色法 25-100 倍。SYBR Green I 与 dsDNA 结合荧光信号会增强 800-1000 倍,用SYBR Green I 染色的凝胶样品荧光信号强,背景信号低,可适用于多种电泳分析。

SYBR Green I 适合于多种凝胶电泳方法:琼脂糖凝胶,聚丙烯酰胺凝胶电泳,脉冲电场凝胶电泳以及毛细管电泳等。

SYBR Green I 与双链 DNA 的亲和力非常高,因此可以用做电泳前染色,对分子生物学中常用的酶(如:Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4 连接酶等)没有抑制作用。另外,SYBR Green I 与 EB相比,诱变能力大大降低。


使用方法:

注意:染料使用前应在室温下彻底融化混匀后使用。

SYBR Green I   后染方法 (推荐方法)

1. 制作不含染料的凝胶,按照常规方法进行电泳。


2. 用 pH 7.0 - 8.5 的缓冲液(如:TAE,TBE 或 TE),按照 10000:1 的比例稀释 SYBR GreenⅠ浓缩液(如 50ml 1×TAE 中加入 5μl 染料),混匀,制成染色溶液。

注:如要染色 RNA ,按照 5000 :1   比例稀释。


3. 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔盖住容器使染料避光。室温振荡染色 10-30 分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色,将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上,让工作液均匀地覆盖整个胶板,并染色 30 分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。


4. 紫外灯下观测。

SYBR Green I   预染方法

1. 6×SYBR loading buffer 预染液的配制:

<table ke-zeroborder" border="0" cellspacing="0" style="border-spacing: 0px;width: 315px;color: rgb(51, 51, 51);font-family: Arial, PingHei, 'Microsoft YaHei', tahoma, STHeitiSC-Light, 'Helvetica Neue', Helvetica, sans-serif;white-space: normal;border: none">

10000×SYBR浓缩液

6μl

6μl

10×DNA loading buffer

0.6ml

-

6×DNA loading buffer

-


1×TE pH8.0

0.4ml

1.0ml

6×SYBR loading buffer预染液

1.0ml

1.0ml


6×SYBR loading buffer 预染液避光 2-8℃可以放置一个月以上。


2. 制胶:按常规方法制备凝胶,凝胶温度降至 60℃左右时加入 10000×SYBR,使染料终浓度为 1×,如 40ml 凝胶溶液中加入 4μl 染料。

注:如要染色 RNA ,使染料终浓度为 2 ×(如 40ml   凝胶溶液中加入 8μl   染料)。

3. 样品预染:取 1-2μl 6×SYBR loading buffer 预染液与电泳样品和 Marker 混合,室温预染3-5 分钟。

4. 上样、电泳后紫外灯下观察。


使用注意事项

1.后染方法是推荐方法,能得到更好的电泳结果;由于 SYBR 对样品过量非常敏感,预染方法容易出现条带扭曲变形(建议泳道中每条带的含量不要超过 5ng),请根据实际情况摸索出适合自己的实验程序,

2. SRBR 对电泳缓冲液的 pH 要求严格,有效 pH 为 7.5-8.0,电泳时尽量使用新鲜配制的缓冲液,并保证合适的 pH 范围。

3. SYBR Green 对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。

4. 使用酒精沉淀核酸中,SYBR Green I 可以全部从双链核酸上去掉。

5. 如果想对用 SYBR Green I 染过的胶进行 Southern blot,建议在预杂交和杂交溶液中加入0.1%- 0.3% 的 SDS,可以有效去除 SYBR。

6. 在紫外下观察,与双链 DNA 接合的 SYBR Green I 呈现绿色荧光。如果胶中含有单链DNA 则颜色为橘黄。


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