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PH1294 | 钙盐染色液(Von Kossa银法)
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PH1294 | 钙盐染色液(Von Kossa银法) 
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货号: PH1294 品牌: Phygene
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产品名称 :PH1294 | 钙盐染色液(Von Kossa银法)
产品品牌 :飞净 PHYGENE

 

货号:PH1294

规格:3×50mL| 3×100mL

保存:常温运输与保存,有效期至12 个月。

产品说明:

钙在人体内大量存在,构成骨骼作为支持人体的支架,在分泌、运送、肌肉收缩、神经传导等也起重要作用。钙在机体内以两种形式存在,一种是离子钙,存在血液循环内,即所谓血钙;另一种是结合钙,和蛋白、碳酸或磷酸结合而沉着在组织内。除骨骼和牙齿外,正常时钙渗透在所有组织和细胞中,一般不以固体状态出现在组织内。但在某些情况下,钙析出成固体并沉着于组织内,则为病理性钙盐沉着。沉着的钙盐主要是磷酸钙,其次为碳酸钙。钙盐通常是单折射的,但草酸钙是双折射的。当使用 HE 染色时,钙一般呈紫蓝色。许多染料可以于钙形成螯合物,包括茜素红 S、红紫素、核固红等。茜素红 S 属一种蒽醌类衍生物,是茜素磺酸钠盐,它能与碳酸钙或磷酸钙中的钙盐螯合形成橙红色复合物。

钙盐染色常用方法有硝酸银法和茜素红 S 法, 钙盐染色液采用 Von Kossa 硝酸银法,其原理在于该法是一种金属置换法,硝酸银溶液作用于含有不溶性钙盐的切片时,钙被银所置换,银盐在光的作用下被还原为黑色金属银,适用于大量样本的钙盐组织染色。

产品组成

试剂组分

3×50mL

3×100mL

Von Kossa银溶液

Aqueous Silver Nitrate

50mL

100mL

海波溶液

Sodium Thiosulfate

100mL

100mL

核固红溶液

Nuclear Fast Red Solution

50mL

100mL

操作步骤仅供参考

1、组织固定于 10%中性福尔马林,常规脱水包埋。

2、切片厚度 5μm 常规脱蜡至水。

3、蒸馏漂洗几次。

4、切片入 Von Kossa 银溶液中(建议透明材质玻璃瓶),强光照射20min(或在60-100瓦的灯泡前放置1小时或更长时间)孵育切片。 注意:如果染色比较浅或在洗涤步骤中被冲洗掉,则表明紫外线强度不足,建议延长染色时间至几个小时不等。

5、蒸馏漂洗几次。

6、加入海波溶液处理 2-5min。

7、蒸馏水漂洗。

8、用核固红复染5分钟。

9、蒸馏水漂洗。

10、通过分级的酒精脱水,并在二甲苯中澄清。

11、中性树胶封固。

实验结果:

钙盐 黑褐色至深黑色

细胞核 红色

细胞质 红色/粉色

注意事项:

1、紫外线通常会产生更强的反应,因此钙盐通常会染成黑色。 普通的60-100瓦的灯泡通常反应较弱,因此钙盐经常染成棕黑色。

2、通常认为草酸盐会产生阴性的von Kossa染色。

3、如有必要,可做阴性对照。这是通过在步骤4之前在10%的甲酸中处理测试载玻片10分钟来完成的。测试载玻片应显示阴性反应。

4、钙盐组织固定以中性福尔马林为佳,不宜采用 Bouin 液等酸性固定液和甲醛钙固定液。如用常规的 10%福尔马林固定,固定 4~6h 后

即可进行脱水包埋,以防止固定液酸化导致钙盐溶解。


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